La RT-PCR en tiempo real sigue siendo el método más preciso disponible para la detección del virus COVID-19.

La escala y la precisión de las pruebas COVID-19 en curso en la India están en un estado de evolución gradual, con la creación de kits nuevos y mejorados desarrollados por compañías de biotecnología en todo el mundo. Recientemente, el Consejo Indio de Investigación Médica ELISA recomendado (abreviatura de 'ensayo de inmunosorbente ligado a enzimas') para que los laboratorios analicen COVID-19.
ELISA se enmarca en una de las dos grandes categorías de pruebas que utilizan todos los países del mundo para mantenerse al tanto de su control de pandemia:
Prueba de anticuerpos (también conocida como prueba serológica)
Pruebas de antígeno
Pruebas basadas en la reacción en cadena de la polimerasa (como RT-PCR y TrueNat)
Si bien algunos son más confiables que otros, ninguna prueba individual es 100 por ciento precisa. Existen diferencias clave entre ellos, en la forma en que funcionan, pero también en sus ventajas y limitaciones, que son exclusivas de cada uno.

Cómo funcionan los anticuerpos o las pruebas 'serológicas'

La prueba de anticuerpos (o prueba serológica) es un examen de proteínas en el torrente sanguíneo para determinar si un individuo ha sido infectado con COVID-19. Una persona infectada tendrá anticuerpos específicos contra los patógenos a los que ha estado expuesta. El sistema inmune produce anticuerpos como parte de un proceso más amplio para defenderse de una infección.
Dicho esto, es posible que las pruebas de anticuerpos no puedan mostrar si el virus está infectando actualmente el cuerpo. A diferencia de una prueba de hisopo nasal o de garganta, que busca firmas genéticas del virus en el cuerpo, una prueba de anticuerpos busca rastros de la respuesta del cuerpo al virus.
Los anticuerpos son abundantes en la sangre, por lo que se recoge una muestra de sangre mediante un pinchazo en el dedo o una muestra de sangre extraída con una aguja. Se buscan dos tipos de anticuerpos específicos en una prueba de anticuerpos:
Un kit de prueba de anticuerpos para COVID-19. Imagen: CCPP19

La prueba de anticuerpos tiene muchos usos en una pandemia

En primer lugar, las pruebas de anticuerpos pueden dar a las autoridades y a los individuos claridad sobre su estado COVID-19.
A nivel comunitario y nacional, las pruebas de anticuerpos generalizadas brindan a los investigadores y autoridades estimaciones de la tasa de infección (qué tan rápido se está propagando el virus en una población) y qué tan fatal es el COVID-19. Estos datos informan decisiones importantes sobre las pruebas, la prevención y el tratamiento de COVID-19.
Junto con otra información recopilada de pacientes en hospitales, las pruebas de anticuerpos también pueden ofrecer información sobre qué factores afectan la gravedad de la infección y por qué algunas personas se ven más afectadas que otras.
Las vacunas se desarrollan bajo el principio de que una inyección imita un caso leve de la infección en sí, y una vez inyectada, ayuda al sistema inmunitario a montar un ataque más fuerte contra un patógeno cuando ataca. Esto ofrece cierta protección contra un ataque a gran escala de COVID-19. Los anticuerpos se fabrican de manera más rápida y copiosa como parte de esta respuesta habilitada para la vacuna.

Limitaciones de la prueba de anticuerpos

Margen de error: Las pruebas de anticuerpos son importantes para establecer quién ha tenido el virus, especialmente porque un porcentaje de personas infectadas parece no mostrar síntomas. Una prueba de anticuerpos puede dar resultados en menos de una hora. Por ejemplo, los kits de prueba de anticuerpos aprobados por ICMR muestran resultados en 30 minutos. La prueba se puede usar de 7 a 10 días después de que alguien está infectado, pero tiene un mayor porcentaje de error que las pruebas de hisopos.
Las pruebas de anticuerpos que buscan anticuerpos IgM suelen ser pruebas rápidas de punción digital que pueden dar resultados en menos de 20 minutos. Pero las pruebas de IgG requieren que se envíe una muestra de sangre a un laboratorio, un proceso que podría tomar una semana para obtener resultados. Las pruebas de IgG son más confiables que las pruebas rápidas de IgM, pero no revelan tanta información sobre la infección por COVID-19 de alguien.
Falsos negativos y falsos positivos: Los muchos kits de diagnóstico en circulación actualmente son una necesidad, pero también son productos de aprobación rápida y de investigación en desarrollo en COVID-19, donde la prioridad es la demanda y la velocidad de la salud pública.
Teniendo en cuenta la naturaleza en desarrollo de la investigación en curso COVID-19, hay sin garantía de calidad, o garantizar que el resultado de una prueba es 100 por ciento exacto. Algunos kits funcionarán mejor que otros.
Puede haber casos en los que la exposición al COVID-19 no sea seguida por la producción de anticuerpos en un individuo, apareciendo como un "falso negativo". Las pruebas que no son de alta calidad también pueden mostrar un 'falso positivo' si un individuo tiene otro virus muy similar en el cuerpo.
Actualmente, ICMR es la autoridad que recomienda el kit más adecuado para las pruebas de anticuerpos generalizadas después de hacer estas debidas consideraciones. UNA informar en el hindú destaca múltiples instancias de Aseguramiento de la calidad de los kits de prueba que carecen severamente.
Los médicos pueden examinar la sangre de los pacientes con COVID-19 para identificar a aquellos con mayor riesgo de enfermedad grave y para identificar a los que tienen más probabilidades de necesitar un ventilador. Crédito de la imagen: U.S.Marine Corps / Pfc. Stephen Campbell
Imprecisiones abrumadoras en las pruebas asintomáticas: Ha habido unas pocas docenas de estudios que miden la precisión de las pruebas de anticuerpos en comparación con un estándar de referencia para detectar una infección COVID-19 en curso o pasada. en un revisión De estos estudios, los autores encontraron que las pruebas de anticuerpos una semana después de la aparición de los primeros síntomas solo detectaban el 30 por ciento de los casos positivos de COVID-19. La precisión aumentó en la segunda semana, con el 70 por ciento de los casos detectados. Fue más alto en la tercera semana, con más del 90 por ciento de los casos detectados.
Sabemos que se necesitan entre 1 y 3 semanas para desarrollar anticuerpos después de que se presentan los síntomas, lo que hace que la prueba sea tan buena como un colapso en las personas que no muestran síntomas.
Falsa sensación de seguridad: Si bien este no es un desafío exclusivo de las pruebas de anticuerpos, es uno que debe considerarse. Al obtener una prueba positiva de anticuerpos contra COVID-19, una persona puede pensar que tener anticuerpos contra COVID-19 los hace inmunes al virus y no los volverá a contraer. Actualmente no hay evidencia que sugiera que las personas que se han recuperado de COVID-19 son inmunes a contraerlo nuevamente.
Incluso si los estudios muestran que se ha encontrado que los anticuerpos ofrecen inmunidad, es difícil establecer cuánto anticuerpo se necesita para ofrecer esta protección, o cuánto durará la protección. Los científicos de todo el mundo están realizando estudios de investigación para responder a estas preguntas.
También hay pruebas rápidas en uso en algunos países para diagnosticar casos activos de COVID-19, ya que las pruebas serían mucho más rápidas y menos invasivas que los hisopos actuales. Los dos tipos de pruebas rápidas que se utilizan actualmente en India son la prueba de antígeno y la prueba de RT-PCR.

Cómo funciona la prueba de antígeno

Las pruebas de antígeno buscan proteínas específicas que solo se encuentran en el virus, que la respuesta inmune del cuerpo reconoce como "extraña". La mayoría de las pruebas de antígeno COVID-19 se dirigen a la 'proteína espiga' que tachona la superficie del coronavirus.
La estructura y la vista transversal del coronavirus humano. Muestra que representa la forma del coronavirus, así como la vista en sección transversal. Crédito de imagen: Wikipedia
Se recolecta un hisopo de la nariz para esta prueba, donde hay una alta probabilidad de que haya partículas de virus presentes. Luego se sumerge el hisopo en una solución que inactiva el virus y luego se transfiere a una tira reactiva. La tira reactiva contiene anticuerpos que se unen a las proteínas del coronavirus y los mantienen en su lugar a medida que el líquido se propaga.
Si la muestra es positiva para coronavirus, aparecerán líneas de color en la tira de papel en 15-20 minutos.

La prueba de antígeno tiene algunas ventajas clave

Una de las principales ventajas de usar antígeno es que reduce la carga de depender solo de las pruebas de RT-PCR para identificar a los pacientes con COVID-19.
"La prueba de antígeno es útil porque, aunque sea menos sensible, es rápida y los resultados positivos serán positivos", dijo el Dr. Gagandeep Kang, director ejecutivo del Transnational Health Service and Technology Institute, le dijo a thePrint en una entrevista. "Entonces, los pacientes que dan positivo pueden aislarse más rápido".
Las pruebas de antígeno eliminan aproximadamente la mitad de los positivos de la carga de prueba, agregó.
Las pruebas de antígeno también son económicas en comparación con RT-PCR, con un costo de alrededor de Rs 450 por prueba.

Limitaciones de la prueba de antígeno

Una prueba de antígeno solo puede revelar si una persona está actualmente infectada con SARS-CoV-2. Antes o después de que la infección haya pasado, los antígenos no estarán presentes.
Dado que las pruebas de antígeno no implican ningún proceso de amplificación del virus o su material genético, una muestra de hisopo puede tener muy poco antígeno para ser detectado. Esto podría producir un resultado falso negativo. Como precaución, una prueba negativa debe ser seguida por la prueba RT-PCR más precisa, para confirmar un verdadero negativo para COVID-19.
La precisión es el mayor problema con las pruebas de antígeno, que son mucho menos sensible que RT-PCR como herramienta de diagnóstico.

Cómo funciona una prueba de PCR

Una prueba de PCR es una prueba muy sensible y ampliamente utilizada que busca rastros de material genético de un patógeno específico, si el patógeno está presente en el cuerpo. La técnica es una poderosa herramienta de diagnóstico que puede identificar tanto ADN como ARN de microorganismos específicos, independientemente de si son bacterias o virus.
Una PCR puede capturar un gen específico a partir de material genético (ADN o ARN) en una muestra de hisopo y multiplicarlo a través de una serie de procesos químicos para que pueda detectarse utilizando tintes fluorescentes.

RT-PCR, una variación de la prueba de PCR

La versión de la prueba de PCR utilizada para detectar virus como el SARS-CoV-2 que causa COVID-19 se llama RT-PCR (PCR de transcripción inversa).
Mientras que algunos virus solo tienen ADN, otros, como el SARS-CoV-2, solo contienen ARN. Los virus infectan una célula sana y piratean la maquinaria natural que usan las células para procesar nuestro propio ARN, de modo que la partícula del virus puede multiplicarse y sobrevivir. Una vez dentro de una célula, el virus usa su ARN para tomar el control de la maquinaria de la célula y "reprogramar" la célula en una fábrica de fabricación de virus.
Para detectar un virus de ARN como el SARS-CoV-2, los científicos usan una enzima (transcriptasa inversa) para convertir el ARN del virus en ADN, en un proceso simple y ampliamente utilizado de un solo paso llamado "transcripción inversa". Esto permite que una sola molécula de ADN se amplifique exponencialmente (millones de veces), que es el objetivo principal del proceso de PCR, por lo que incluso las partículas de virus en un solo dígito se pueden detectar en el resultado final.
Una prueba de RT-PCR se considera muy confiable porque puede detectar incluso un solo virus partícula en hisopos tomados del interior de la boca o la nariz, donde las partículas de virus son más frecuentes.

Ventajas de las pruebas de RT-PCR

Rápido, sensible y específico: Existen variaciones en tiempo real de la técnica RT-PCR que son rápidas, súper sensibles y específicas. Pueden entregar un diagnóstico confiable en tres horas. Dicho esto, el proceso en promedio toma alrededor de ocho horas para producir un resultado concluyente.
Más preciso, menos propenso a la contaminación: En comparación con otros métodos para aislar y detectar virus, RT-PCR es mucho más rápido y tiene menos probabilidades de contaminarse o causar errores durante el proceso de prueba. Esto se debe a que la prueba, de principio a fin, se lleva a cabo en un tubo cerrado, dentro de una máquina especializada y automatizada.
RT-PCR en tiempo real sigue siendo el método más preciso Tenemos que detectar el virus SARS-CoV-2.
La gravedad de la infección se puede estimar: Una configuración estándar de RT-PCR en tiempo real generalmente pasa por 35 ciclos, lo que significa que, al final del proceso, se crean alrededor de 35 mil millones de nuevas copias de las secciones de ADN viral de cada cadena del virus presente en el muestra.

Limitaciones de las pruebas de RT-PCR

Solo detecta infección en curso: La principal limitación de las pruebas de RT-PCR es que no se puede usar para detectar una infección previa con SARS-CoV-2, que es importante para comprender el desarrollo y la propagación del virus, ya que los virus solo están presentes en el cuerpo para un caso específico. ventana de tiempo
Se necesitan otros métodos para detectar, rastrear y estudiar infecciones pasadas, particularmente aquellas que pueden haberse desarrollado y propagado sin síntomas. Una vez que se haya recuperado, el virus se elimina y estas pruebas ya no pueden determinar si ha sido infectado. Esto crea una incertidumbre significativa, especialmente si alguien se ha autoaislado debido a síntomas leves y poco claros.
Requiere equipo especializado, capacitación: A diferencia de las pruebas de anticuerpos, que requieren un kit y personal médico / paramédico capacitado para usar el kit, las pruebas de RT-PCR necesitan instrumentos específicos en un laboratorio, lo que hace que requiera más tiempo. Incluso si la prueba en sí misma toma solo unas pocas horas, el proceso de recolectar y etiquetar muestras, transportarlas a un laboratorio y procesar las muestras a granel asegura que pasen días antes de que se conozcan los resultados de una sola muestra.
Las máquinas de RT-PCR rápidas y portátiles están a la vanguardia de la tecnología de diagnóstico, y a menudo requieren capacitación especializada para garantizar que la máquina no se use mal, lo que requiere cierto nivel de experiencia y capacitación. Las pruebas solo se están desarrollando y poniendo a disposición para estos instrumentos avanzados.
El control de calidad no es una garantía: En una pandemia, el uso de herramientas de diagnóstico incluso muy precisas es más propenso a errores que las pruebas de diagnóstico diarias. RT-PCR, si bien es una herramienta revolucionaria en el diagnóstico, también se puede usar o malinterpretar fácilmente. Depende de una muestra confiable de ADN existente del virus, como referencia, para encontrar el patógeno en una prueba. También es lo suficientemente sensible como para detectar la contaminación como falso positivo.
Cuando el brote comenzó a extenderse por primera vez en India, el Instituto Nacional de Virología de Pune fue la única prueba de laboratorio para COVID-19. Hoy hay 1,000. La validez y la precisión de una prueba dependen completamente de la calidad del laboratorio. Los informes hindúes múltiples instancias de laboratorios de prueba privados y públicos (incluidos los laboratorios de control de calidad) que regresan falsos positivos a un ritmo alarmante. Los expertos han pedido un control de calidad interno y una evaluación de calidad externa como un requisito urgente para que las pruebas de PCR se consideren confiables.

La cantidad se combina con la calidad con las pruebas TrueNat

La mayoría de las pruebas de PCR modernas pueden detectar una amplia gama de patógenos en tiempo real, con resultados visibles a medida que la reacción en cadena está en marcha. TrueNat es una máquina RT-PCR portátil basada en chip, desarrollada originalmente como una herramienta de diagnóstico portátil para la tuberculosis por la startup Molbio Diagnostics con sede en Goa.
El dispositivo está en camino de convertirse en una de las principales herramientas de diagnóstico para COVID-19, ya que India busca expandir su capacidad de prueba. Es la técnica basada en PCR más rápida disponible recomendada por ICMR hasta la fecha.
Kit de prueba TrueNAT para COVID-19. Imagen cortesía de: IndiaMart
Las últimas versiones de la máquina TrueNat pueden detectar una enzima (llamada RdRp) que se encuentra en el ARN del coronavirus SARS-CoV-2. El ICMR ha dictaminado que estas pruebas pueden tratarse como una confirmación de la presencia del coronavirus.
TrueNat puede devolver resultados más rápido que las pruebas estándar de RT-PCR, según Sriram Natarajan, CEO de Molbio Diagnostics. Pero no es tan preciso. Casos encontrados positivos en un dispositivo TrueNat necesita ser reconfirmado con pruebas tradicionales de RT-PCR, según un Asesor de ICMR.
en un carta compartida por ANI con fecha 4 de julio, ICMR ha asesorado a laboratorios privados en estados y territorios de la Unión que tienen la intención de usar TrueNat para las pruebas COVID-19 para solicitar la acreditación NABL de inmediato, para garantizar resultados confiables.

El Consejo Indio de Investigación Médica (ICMR) ha escrito a todos los estados / UT diciendo que todos los laboratorios privados en su estado que tienen la intención de iniciar pruebas basadas en TrueNat / CBNAAT para #COVID-19 debe alentarse a solicitar de inmediato la acreditación NABL para garantizar pruebas de calidad. pic.twitter.com/zm3Xlva3Av
– ANI (@ANI) 3 de julio de 2020

La mayoría de los países han recurrido a las pruebas basadas en PCR porque son confiables y su desarrollo más rápido. Dado que las pruebas de anticuerpos son a menudo una opción más rápida, económica y fácilmente escalable, el número de casos reportados aumenta abruptamente a medida que se amplían las pruebas de anticuerpos y se abordan las brechas en las pruebas.
Las grandes diferencias en las estrategias de prueba de país a país hacen que los números netos entre países sean incomparables en cualquier sentido real. Pero a nivel nacional, los procedimientos y equipos estandarizados para pruebas generalizadas pueden garantizar que se divulguen datos consistentes.
La capacidad de prueba continúa siendo un desafío para la India, considerando la escala del brote, la naturaleza de rápido desarrollo del brote en algunos estados, la lenta evolución de la investigación y los kits de prueba confiables, y el control de calidad de los procedimientos de prueba.

Via: FirstPost